graf_kankrin (graf_kankrin) wrote,
graf_kankrin
graf_kankrin

Categories:

Последняя бактериологическая...

Часть I. Предвестники апокалипсиса

Туберкулёз_001

Часть II. О том, как американские врачи приравняли россиян к папуасам, а "неблагодарные" россияне от такой "чести" отказались

В последние годы во многих больницах наблюдается ситуация, которую врачи уже назвали предвестником апокалипсиса и началом возвращения в темные века - статистика летальных исходов при заболеваниях, которые раньше успешно лечились, существенно возросла.

Сейчас, когда весь мир обеспокоен военным противостоянием между США и Северной Кореей, которое, теоретически, может перерасти в ядерную войну. На этом фоне другие, менее очевидные опасные факторы игнорируются - и очень зря, поскольку они, в отличие от гипотетической ядерной войны в Юго-Восточной Азии, реально угрожают существованию человечества.

Наиболее опасным из таких факторов является появление новых штаммов патогенных (вызывающих инфекционные заболевания) микроорганизмов. Сегодня мы рассмотрим это явление на примере такого известного всем заболевания, как туберкулёз.

Туберкулёз_002

Заболеваемость туберкулёзом по странам мира

Туберкулёз — широко распространённое инфекционное заболевание человека и животных, вызываемое различными видами микобактерий из группы Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis и другими близкородственными видами). Туберкулёз обычно поражает лёгкие, реже затрагивая другие органы и системы. Mycobacterium tuberculosis передаётся воздушно-капельным путём при разговоре и, особенно, при кашле больного. Чаще всего после инфицирования микобактериями (по разным оценкам M. tuberculosis инфицирована примерно треть населения нашей планеты) заболевание протекает в бессимптомной, скрытой форме, но примерно один из десяти случаев скрытой инфекции, в конце концов, переходит в активную форму подробно о туберкулёзе.

Методы выявления больных туберкулёзом включают в себя: первичное выявление (скриннинг) носителей туберкулёзной инфекции, для которого используется устаревшая и малоинформативная внутрикожная туберкулиновая проба (реакция Манту), современная высокоспецифичная внутрикожная проба "Диаскинтест" и цифровая малодозная рентгенография (флюорография), и лабораторные методы, позволяющие выявить непосредственно возбудитель заболевания - M. tuberculosis либо её ДНК и на этом основании поставить диагноз: "туберкулёз".

Самым простым методом выявления микобактерий туберкулеза в выделениях больных является микроскопия мазка, приготовленного из патологического материала (в большинстве случаев - мокроты). При бактериоскопии мазка, окрашенного по Цилю-Нильсену, микобактерии туберкулеза могут быть обнаружены при наличии не менее 100 000 - 1 000 000 бактериальных клеток в 1 мл патологического материала (мокроты). Такое большое количество микобактерий встречается у больных с далеко зашедшими прогрессирующими формами заболевания (диссеминированными и фиброзно-кавернозными). У значительно большего числа больных количество выделяемых ими микобактерий ниже предела метода бактериоскопии.

Туберкулёз_003

Мазок, окрашенный по Цилю-Нильсену, изображение, полученное при помощи обычного светового микроскопа. Видны единичные M. tuberculosis, окрашенные в красный цвет

Чувствительность метода люминесцентной микроскопии значительно выше - от 10 000 до 100 000 микобактерий в 1 мл материала, кроме того, этот метод дает возможность за значительно более короткое время просмотреть необходимое количество препаратов. Подготовка материала для микроскопии с использованием разработанного в России иммуномагнитного метода, обеспечивает концентрацию возбудителя в осадке гомогенизированной мокроты, позволяя значительно повысить эффективность метода, особенно при незначительном количестве микобактерий туберкулеза в материале. Эффективность бактериоскопии повышается также при передаче изображения на компьютер при помощи присоединенной к микроскопу видеокамеры. Широкое распространение метода люминесцентной микроскопии сдерживается, в основном, высокой стоимостью оборудования.

Туберкулёз_004

Мазок, окрашенный ауромином, изображение, полученное при помощи люминесцентного микроскопа. Видны единичные M. tuberculosis, выделяющиеся оранжево-жёлтым свечением

Культуральный метод выявления микобактерий туберкулеза посевом на твердую яично-картофельную среду Левенштайна-Йенсена, реже на среды Фин-2 и В.А.Аникина, дает положительные результаты при наличии в исследуемом материале от 20 до 100 жизнеспособных микробных клеток в 1 мл. Однако он трудоемок и длителен в связи с тем, что микобактерии туберкулеза растут очень медленно и их колонии можно наблюдать только через 2-2,5 месяца. Диагностические возможности культурального метода ограничиваются длительным периодом роста микобактерий, а также тем, что при активном туберкулезе легких этим методом возбудитель выделяется только в 52 - 65% случаев. При внелегочном туберкулезе процент выявлений культуральным методом еще ниже. Так, например, при туберкулезном менингите рост микобактерий на питательных средах наблюдается только в 3% случаев.

Туберкулёз_005

Колонии M. tuberculosis, выращенные на питательной среде

Московским НИИ фтизиопульмонологии рекомендуется комплексная методика исследования мочи на наличие микобактерий туберкулеза. Из одной и той же порции одновременно выполняется люминесцентная микроскопия осадка, окрашенного ауромином, и посев не менее чем на две питательные среды. Микобактерии, потерявшие кислотоустойчивость, но сохранившие жизнеспособность, выявляются посевом, а потерявшие жизнеспособность, но сохранившие кислотоустойчивость - бактериоскопией. К сожалению, широкое внедрение этой методики сдерживается, как уже было отмечено выше, высокой стоимостью лабораторного оборудования для люминесцентной микроскопии. Также существует ряд факторов, ограничивающих широкое применение культурального метода, в частности, необходимость использования дорогостоящих питательных сред. 

За рубежом широкое распространение получили автоматизированные системы для относительно быстрого (10-20 дней против 60-75 дней на стандартной плотной среде Левенштайна-Йенсена) обнаружения микобактерий туберкулеза в жидкой питательной среде К сожалению, высокая стоимость оборудования делает повсеместное внедрение этого метода в практику лабораторной диагностики туберкулеза маловероятным. 

Полимеразная цепная реакция (ПЦР), основанная на обнаружении участка ДНК, характерного только для данного возбудителя, может служить одним из методов экспресс-диагностики туберкулеза. Высокая чувствительность ПЦР позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки или даже фрагменты ДНК возбудителя в течение 4-5 часов.

Туберкулёз_006
Результаты ПЦР

Благодаря отсутствию перекрестных реакций с ДНК бактерий - возбудителей других легочных инфекций (L.pneuphila, M.pneumoniae, K.pneumoniae, Y.pestis, Y.pseudotuberculosis, S.aureus, E.coli, F.tularensis), а также с ДНК человека, ПЦР обладает высокой специфичностью (100%). Чувствительность ПЦР при тестировании образцов патологического материала полученного от больных с различными формами туберкулеза легких составляет: мокроты - 63,5-80,0%, мочи - 50,0-78,8%, плевральной жидкости - 45,8-54,5% и крови - 17,2-42,8%. Моча достаточно часто служит прекрасным материалом для выявления специфической ДНК у больных с распространенным туберкулезом легких, без сопутствующего специфического процесса в почках и мочевыделительной системе.

ПЦР дает возможность дифференциальной диагностики при ограниченных формах туберкулеза (очаговых инфильтратах, туберкулемах, туберкулезе внутригрудных лимфатических узлов), а также при диссеминированной форме туберкулеза, при которых дифференциальная диагностика с использованием только традиционных микробиологических методов весьма затруднена в связи с редким обнаружением возбудителя в мокроте. Обобщая результаты бактериоскопии, посева на плотные питательные среды и исследования методом ПЦР материала, полученного от больных ограниченными формами туберкулеза можно сделать вывод о том, что последняя обладает значительно более высокой чувствительностью по сравнению с традиционными методами. В частности при сравнительном исследовании одного и того же материала бактериоскопией было получено 11,2% положительных результатов, методом посева на питательные среды - 19,3%, и методом ПЦР - 51,6% таких результатов.

Практически полное совпадение результатов сравнительного исследования патологического материала микробиологическими методами и методом ПЦР отмечается только при хронических деструктивных формах туберкулеза легких: кавернозной и фиброзно-кавернозной. Такое совпадение результатов обусловлено наличием у пациентов постоянного массивного бактериовыделения, характерного для таких форм туберкулеза.

К сожалению, наряду с многочисленными достоинствами ПЦР обладает и существенным недостатком, а именно значительным процентом ложноположительных результатов, связанных как с широким распространением M. tuberculosis, которой, как было отмечено выше, инфицировано более трети населения нашей планеты и более половины взрослого населения России, так и с внутрилабораторной контаминацией (попаданием ДНК M. tuberculosis в препараты, её не содержащие).

Но самым главным преимуществом ПЦР является возможность экспресс-определения резистентности (устойчивости) микобактерий туберкулеза к лекарственным препаратам методом выявления точечных мутаций в генах.

#Туберкулёз #Антибиотики
Tags: #Антибиотики, #Туберкулёз, m. tuberculosis, mycobacterium tuberculosis, ДНК, Диаскинтест, Манту, ПЦР, бактериоскопия, культуральный метод, люминесцентная микроскопия, микроскопия мазка, полимеразная цепная реакция, посев, реакция, туберкулиновая проба, туберкулёз, флюорография
Subscribe
Buy for 500 tokens
Buy promo for minimal price.
  • Post a new comment

    Error

    default userpic

    Your reply will be screened

    Your IP address will be recorded 

    When you submit the form an invisible reCAPTCHA check will be performed.
    You must follow the Privacy Policy and Google Terms of use.
  • 20 comments
Previous
← Ctrl ← Alt
Next
Ctrl → Alt →
Previous
← Ctrl ← Alt
Next
Ctrl → Alt →